暗场观察是一种利用倾斜照明来增强样品在正常照明条件下成像不佳的对比度的技术，在直射光被聚光镜中的不透明光阑遮挡后，从倾斜角度穿过样品的光线被衍射、折射并反射到显微镜物镜中，以形成叠加在深色背景上的标本的明亮图像。

暗场观察的原理其实是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。

暗场观察需要特殊的暗视野聚光镜，不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。

暗场观察的特点是能够观察到极其微小的物体，分辨率可达0.02~0.004微米，缺点是只能观察到物体存在、运动和外部形态不方便调节，标本要求比较高。