显微观察之显微荧光观察
2024-09-30
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什么是荧光?
荧光是一种分子现象,一种物质吸收某种颜色的光,与此同时辐射另外一种颜色的光,后者能量更低,波长更长,这种过程被称为激发和发射,很多物质都会表现出一定的荧光特征。在早期,观察的都是初级荧光或自发荧光,但是现在已经开发出许多染料,他们能够发出很亮的荧光,可以用来给样品某些部分染色,这种方法叫次级或间接荧光,这些染料叫荧光染料,当与抗体和核酸等其他有机物质轭和时,称为荧光探针和荧光团。
荧光是怎么产生的?
荧光染料吸收特定的波长的光(激发光)的照射,与此同时释放出特定波长的光(发射光),荧光染料所需要的激发光是特定波长的,发射荧光也是特定波长的,发射光的波长大于激发光的波长(短波激发长波)。
荧光光谱
激发光谱通过测量荧光物质的荧光发射强度随激发波长变化而获得的光谱,发射光谱反映荧光物质的荧光发射强度与发射光波长之间相互关系的光谱曲线。
![光波范围](/uploads/editor/image/20240930/3f6acb33d895a535d8a5e64f8054fd83.jpg)
荧光显微镜和荧光滤块
荧光显微镜是利用荧光特性进行观察、成像的光学显微镜,广泛应用于细胞生物学、神经生物学、植物学、微生物学、病理学、遗传学等各领域。荧光成像具有高灵敏度和高特异性的优点,非常适合进行特定蛋白、细胞器等在组织及细胞中的分布的观察,共定位和相互作用的研究等。荧光显微镜大致主要分为正置荧光显微镜、倒置荧光显微镜、体视荧光显微镜。
荧光滤块是荧光成像中的重要部件,主要有激发滤片、发射铝片、二向分光镜组成,安装在激发块盒子里。激发滤片选择激发光来激发样品,阻挡其他波长的光;通过激发滤片的光经过二向分光镜(其作用是反射激发光和透射荧光),反射后通过物镜聚焦,照射到样品,激发出对应的荧光即发射光,发射光被物镜收集,透过二向分光镜,到达发射滤片。而荧光滤块一般又可分为长通(LP)和带通(BP),带通通常由中心波长和区间宽度确定,如530/40nm表示可通过510-550nm的光。长通滤色片如510 LP,表示可以通过波长长于510nm的光。